正確的洗板操作對(duì)于降低ELISA實(shí)驗(yàn)中的變異和消除背景干擾至關(guān)重要。如果您正在使用自動(dòng)化洗板設(shè)備或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的變異程度高于預(yù)期，希望以下文章和視頻能幫助您優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果回歸正常。

手動(dòng)洗板的優(yōu)點(diǎn)

雖然ELISA洗板的目的是去除未結(jié)合的反應(yīng)物，但過(guò)度洗板會(huì)不同程度上導(dǎo)致抗體與目標(biāo)蛋白解離，從而導(dǎo)致吸光值偏低和%CV值偏高。此外，殘留液體去除不完全（通常發(fā)生在自動(dòng)洗板設(shè)備中）也會(huì)導(dǎo)致更高的檢測(cè)背景，這些對(duì)HCP ELISAs檢測(cè)尤為不利，因?yàn)?/span>其本身就具有較高的基線吸光值。

因此，Cygnus專(zhuān)家建議在使用Cygnus ELISA試劑盒時(shí)盡量采用手動(dòng)洗板的方法。該方法簡(jiǎn)便易學(xué)，無(wú)需任何特殊設(shè)備。只要準(zhǔn)備一些低纖維吸水紙和一個(gè)洗瓶就可輕松操作，需要注意的是洗瓶的出水口要修剪成大開(kāi)口斜面以確保洗液的充分流動(dòng)與合適的沖洗力度。

修剪洗瓶出水口

準(zhǔn)備工作：稀釋洗滌液并準(zhǔn)備好洗板操作區(qū)域

用蒸餾水將20×的濃縮洗滌液稀釋至1×洗滌液裝入洗瓶?jī)?nèi)，將吸水紙鋪開(kāi)放在水槽旁邊干凈的工作臺(tái)上。

注：請(qǐng)勿使用除ELISA試劑盒提供之外的其他洗滌液，這樣可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

第一步：倒出ELISA孔板內(nèi)的液體

用拇指按住ELISA板一側(cè)的中間位置，用食指按住另一側(cè)，從底部托起ELISA板?？梢杂媚粗负褪持缚圩?/span>孔板條或板條兩端的標(biāo)簽，以避免板條從板托中掉出。在水槽上方迅速翻轉(zhuǎn)孔板，借助手臂的力量快速向下移動(dòng)并突然停止，動(dòng)作要連貫，讓液體借助慣性從孔板內(nèi)甩入水槽。在操作正確的情況下，手指、孔板條和板托外側(cè)不應(yīng)沾上任何液體。然后重復(fù)這個(gè)傾倒動(dòng)作一次。

注：如果擔(dān)心孔板條從板托中掉出，可以在每個(gè)孔板條上提前標(biāo)注好位置。

第二步：用吸水紙吸干殘留液體，然后輕輕拍板

立即將倒扣的孔板按壓在吸水紙上，并將孔板移至吸水紙未使用的區(qū)域，輕輕拍板三次，每一次拍板都要在吸水紙未使用的區(qū)域。不要用力拍板，如果拍板力度過(guò)大會(huì)在板上傳遞不均勻的沖擊能量，致使抗體/分析物復(fù)合物的解離。

第三步：清洗孔板

用裝有1×洗滌液的洗瓶，從板的上邊一側(cè)開(kāi)始，將洗滌液逐個(gè)填滿(mǎn)所有孔到溢出，直至最后一個(gè)孔，然后再按照步驟1和2的方法丟棄洗滌液并輕輕拍板。

注：不用擔(dān)心洗滌液從孔內(nèi)溢出，但要避免洗滌液在孔內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間浸泡。

重復(fù)上述步驟3次，總共進(jìn)行4次洗板操作。需要注意的是，在第2次和第4次洗板時(shí)，要從板的下邊一側(cè)反方向逐孔加入洗滌液。這樣操作可以確保所有孔的洗滌液總浸泡時(shí)間基本相同。另外，無(wú)需額外增加洗板次數(shù)，這樣可能會(huì)使結(jié)合在抗體上的分析物解離，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度降低。

最后一次洗板后，還是按照步驟1和2所述的方法吸干/輕拍吸水紙。然后將ELISA板倒扣在吸水紙上靜置約20秒，以便徹底排干殘留液體，最后再在吸水紙上拍板4次。

注：每次拍板后，孔板最好能在手中水平旋轉(zhuǎn)180度，這樣可以確保板兩端的受力更加均勻。

第四步：擦干多余液體

用干凈的吸水紙擦拭孔板的底部外部，清除殘留的洗滌液。最后將洗好的ELISA板放回到實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)并加入底物。

注：不要讓孔板徹底晾干，否則酶的活性將會(huì)受到影響。底物要遠(yuǎn)離水槽，因?yàn)橄窗暹^(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，導(dǎo)致孔板或者底物被污染，影響檢測(cè)結(jié)果。

最后，請(qǐng)觀看以下洗板操作視頻，幫助您快速掌握這一精確的技術(shù)！

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